[00148603]沉水樟等木本植物的克隆技术及应用

本成果属应用基础研究。沉水樟、金丝楸、二乔刺槐和悬铃木分别为我国重要的城市绿化和用材树种，大力种植沉水樟、金丝楸、二桥刺槐和悬铃木对改善生态环境、提高人民生活质量具有重要的生态意义、经济意义和社会意义。然而，由于树种本身和繁殖栽培技术上的原因，目前这4种苗木在生产实践中存在造林苗木短缺的问题。　　本项研究利用生物技术上的组织培养技术，进行4种苗木的体外器官发生和体细胞胚胎发生途径的研究，实现了4种苗木的室内繁殖和生产上的应用。　　1、沉水樟茎段芽和根诱导试验结果表明，茎段芽诱导的培养基为MS+0.2IBA+5BA，根诱导的培养基为1/2MS+0.3IAA。　　2、将金丝楸当年生幼嫩的茎段接种在WPM+BA 5.0+IBA 0.3的芽诱导培养基上，15d后可看到切口处膨大，呈淡绿色瘤状物，25d后，能看到有绿色的小芽出现。20d后，多数芽能长到2cm以上。将3cm左右的无根苗接种到1/2MS+NAA 0.5生根培养基上，5d后从茎切口处可看到白色突起，10d后有白色根形成。30d后，小苗可长到5cm高，根可达4cm左右，小苗生长长健壮，可用于移栽。　　3、剪去叶缘二乔刺槐的叶片在诱导芽培养基上，7d后可以看到在WPM+IBA 0.25+BA 5+GA3 0.05培养基上外植体切口处膨大，15d后，有绿色的愈伤组织形成，随着培养时间的延长，愈伤组织逐渐增多且上面形成许多小突起。30d后，可以看出在小突起的地方形成许多绿色芽点，45d后形成芽丛。将生长到2-3cm左右的无根苗接种到培养基上，10d后，可以看到在WPM+IBA 0.3、WPM+IBA 0.4、WPM+IBA 0.5培养基上茎下部切口出均有小突起形成，15d后，能看出有根状物形成，30d后可以形成4～5cm长，生长健壮的根系。生根率均可达到90%以上。　　4、悬铃木幼苗叶片在WPM+0.1 IBA+5.0 BA培养基上的愈伤组织诱导率和胚性愈伤组织诱导率分别为100%和89.1%；25℃的温度有利于胚性愈伤组织在WPM+0.5 BA培养基上进行体细胞胚胎发生；黑暗低温处理（10℃）3d不但可以促进体细胞胚胎的发生的过程，而且可以提高其发生频率。　　5、找出了以上几种木本植物炼苗的最适途径。　　该成果根据细胞全能性原理，国内外首次利用沉水樟、金丝楸、二乔刺槐和悬铃木的叶片或茎段通过体细胞胚胎发生或器官发生途径建立了他们的体外植株高效再生系统，解决了林业生产用苗的问题，同时也为利用现代生物技术培育新品种奠定了坚实的基础。　　本成果的推广采用边试验边推广的技术路线。现在河南省许昌市林业技术推广站、河南省林科院和河南省禹州市火龙镇等单位的配合下，利用实验室培育出的组培苗在许昌县张盘乡、禹州市火龙镇和张得乡等地育苗1000余亩，创造了显著的经济效益和社会效益。