[00148903]基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的镇肝熄风法抑制帕金森病氧化应激损伤的机制研究

多巴胺能神经元损伤是帕金森病（PD）的病理关键,抗氧化损伤是防治帕PD行之有效的途径,镇肝熄风是中医治疗PD的常用治法。本研究采用附子汤灌胃联合6-羟基多巴胺（6-OHDA）单侧损毁黑质法复制PD肝阳上亢型病证结合大鼠模型。动物实验研究发现：镇肝熄风汤改善了肝阳上亢型PD模型大鼠易激惹程度、结膜充血、转棒运动潜伏期和旋转行为。镇肝熄风汤抑制肝阳上亢型PD模型大鼠中脑组织细胞凋亡和caspase-3活性、上调酪氨酸羟化酶（TH）蛋白表达、减少了丙二醛含量和活性氧簇（ROS）产生、增加谷胱甘肽（GSH）/氧化型谷胱甘肽（GSSG）比值。镇肝熄风汤呈剂量依赖性的增加了肝阳上亢型PD模型大鼠中脑组织蛋白激酶B（Akt）和糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）（Ser9）磷酸化、上调核转录因子E2相关因子2（Nrf2）基因表达、诱导了II相抗氧化酶血红素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶-1（NQO-1）和谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基（GCLc）的基因表达。体外实验研究发现：镇肝熄风汤含药血清抑制了6-OHDA诱导PC12细胞死亡和凋亡,减少了ROS产生,降低了脂质过氧化（LPO）水平增加。镇肝熄风汤含药血清上调了6-OHDA处理的PC12细胞中Nrf2基因表达,增加抗氧化反应元件（ARE）荧光素酶活性。镇肝熄风汤含药血清呈剂量依赖性上调了6-OHDA处理的PC12细胞中GCLc、HO-1和NQO1的蛋白和mRNA表达。镇肝熄风汤含药血清呈Akt/GSK-3β通路依赖的抑制了6-OHDA诱导PC12细胞死亡、LPO增加和ROS产生。镇肝熄风汤含药血清增加了Akt和GSK-3β磷酸化水平,镇肝熄风汤含药血清呈Akt/GSK-3β通路依赖的上调了II相抗氧化酶（HO-1、NQO-1和GCLc）蛋白表达,诱导了Nrf2核转位、提高了ARE荧光素酶活性。本研究结果阐明镇肝熄风法治疗PD肝阳上亢证的作用机制和效应环节,为临床用药提供可靠的药理学依据。减少传统中医辨证用药中存在的局限性和盲目性,幷进一步丰富中医镇肝熄风法的科学内涵。本项目研究结果发表论文15篇,其中SCI收录论文7篇。