[00150014]构建无选择标记的自主发光脓肿分枝杆菌的方法及建立相应体外高通量筛药模型
技术详细介绍
摘要：本发明公开了构建无选择标记的自主发光脓肿分枝杆菌的方法及建立相应体外高通量筛药模型。在该构建过程中，关键是重组质粒pOPAI1B的构建，pOPAI1B中含有发光所需酶基因LuxCDABE，抗性筛选基因Apr和整合酶基因Int的融合基因，位于融合基因两端的同向重复序列DifR和DifL，以及噬菌体整合位点attP和复制子。重组质粒pOPAI1B转入脓肿分枝杆菌中经过筛选获得抗性基因和整合酶基因均丢失的无抗性筛选标记的自主发光脓肿分枝杆菌。本发明构建的自主发光脓肿分枝杆菌可以高通量筛选药物，通过检测细菌发光情况判定药物的杀菌或抑菌效果，可用于体外药物活性检测，不需要任何底物，可连续检测同一样品，灵敏度高，重复性强。
