[00150063]氢气对重度脓毒症肠屏功能障碍的影响及分子机制

肠屏障功能障碍是重度脓毒症时多器官衰竭的“Motor”。本课题组前期发现氢气显著改善脓毒症小鼠生存率和器官功能,也减轻肠组织病理损伤。Rho信号通路在调控细胞间紧密连接中起关键作用,参与脓毒症肠屏障功能障碍的调节。我们预实验发现氢气明显降低肠组织中RhoA表达,表明：Rho-ROCK/mDia通路参与氢气保护脓毒症肠屏障功能障碍的过程。 本项目拟从细胞和动物水平,利用透射电镜、激光共聚焦显微镜、ELISA、PCR、IHC、Western-blot等技术观察氢气对重度脓毒症小鼠肠上皮细胞和细胞间超微结构的改变,肠上皮细胞间连接蛋白的异常分布与表达,及肠粘膜通透性、细菌移位和炎症因子水平等影响;同时检测RhoA及下游ROCK和mDia的表达情况,及对下游底物肌球蛋白轻链磷酸化的影响;此外利用相关干预剂,明确Rho-ROCK/mDia通路在氢气治疗脓毒症肠屏障功能障碍中的具体机制。本项目拟在前期工作的基础上,从离体细胞和在体动物水平,利用透射电镜、免疫荧光、IHC、PCR、Western-blot和GST Pull-Down等技术,首先,观察氢气治疗前后脓毒症动物肠组织病理和损伤评分、肠上皮细胞和细胞间紧密连接等超微结构的形态学改变,肠粘膜通透性改变,细菌移位和炎症因子表达等变化,明确氢气对脓毒症肠屏障功能障碍的具体保护作用;其次,观察氢气治疗前后离体肠上皮细胞屏障损伤模型和脓毒症动物肠上皮细胞间紧密连接蛋白和黏附连接蛋白的表达情况以及Rho的活性,明确Rho在氢气治疗脓毒症肠屏障功能障碍中的调节作用;在此基础上,观察氢气治疗前后Rho下游效应蛋白ROCK和mDia蛋白表达和定位、肠细胞间通透性和细胞间连接蛋白表达改变,并给予ROCK和mDia的相关干预剂,探讨ROCK和mDia在氢气治疗脓毒症肠屏障障碍中的具体作用。在上述结果的基础上,明确氢气治疗脓毒症的关键机制并提供坚实的理论基础,为临床更有效地治疗脓毒症提供新的思路,为氢气治疗疾病的研究奠定基础。