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本发明公开了一种检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA试剂盒。该试剂盒由副猪嗜血杆菌细胞致死性膨胀毒素C(cytolethal distending toxin,CDT-C)蛋白作为包被抗原的ELISA包被板、待检样品稀释板、阳性对照血清、阴性对照血清、20倍浓缩洗涤液、血清样本稀释液、酶标抗体工作液、显色液和终止液组装而成。判定标准:S/P值<0.200,判为阴性;S/P值≥0.200,判为阳性,S/P值=(待测样本OD450nm均值-阴性对照OD450nm均值)/(阳性样本OD450nm均值-阴性对照OD450nm均值)。通过特异性试验、敏感性试验、重复性试验、符合率试验、与上市试剂盒比较试验、临床应用试验等,表明本试剂盒具有特异性好、敏感度高、重复性好等特点,与国外同类上市产品具有较高符合率,可用于副猪嗜血杆菌抗体的临床大规模检测和流行病学调查。