[00150165]冷箭竹全长cDNA文库构建技术

以我国常见竹种冷箭竹为材料，通过引进消化，创新出一套完整的全长cDNA文库构建技术。全长cDNA包括了完整的基因编码区和非翻译区。根据基因的编码序列，我们能够对基因编码的氨基酸序列、保守结构域和功能进行预测。利用这些编码序列与近缘物种的同源基因序列进行比较，可以为竹类作物的系统进化分析提供依据。同时，由于全长cDNA序列还包含了基因非编码区域的全部序列信息，即5“-和3”－非翻译区的序列，为研究基因表达调控的研究提供了重要的信息。尤其重要的是，全长cDNA序列确定了基因的转录起始位点和终止位点，为竹类作物的基因克隆和启动子研究提供了的极为重要的信息。 　　技术关键：自2005年初引进该技术方法以来，创新构建的冷箭竹地下茎全长cDNA文库。在保证插入片段长度、空载率、文库丰度等方面获得了良好效果，并在mRNA 5´端修饰技术包括CAP酶切和接头的连接；全长cDNA转录反应体系的优化两个关键技术上有所创新。克服了传统的cDNA文库构建难以避免的诸多缺陷：如cDNA合成不佳，连接效率低，在限制性酶切过程中造成克隆缺口或者断裂。 　　主要技术指标：构建的冷箭竹笋全长cDNA文库，插入片段长度较大，其中0.3～0.6kb0.8万，0.6～1.0kb10万，1.0～2.0kb9.2万条。　　目前已进行完成测序约800条工作，其中210条序列已经被收录入构建的竹子全长Cdna序列数据库（MBCD）中。该库是目前世界上第一个竹类作物的基因序列数据库，它包含的数据库量已经超过以前世界公共数据库中所有竹子序列数量的总和，为竹类植物的基因组研究提供了一个很好的技术平台。也为今后可能的相关比较基因组研究建立了重要的材料准备。同时，该技术的建立，对通过基因工程途径改良竹材性状，提高竹材品质，具有较强的科学意义和价值。