[00150277]对虾白斑杆状病毒定量PCR检测研究

对虾白斑杆状病毒（WSBV）是引起对虾病害的一种主要病原，是一种没有包涵体的新型杆状病毒，该病毒毒力强，宿主范围广，死亡率高，迄今为此没有有效的治疗方法，因此必须建立简便快速、有效的检测方法，通过早期诊断、及早预防，防止病毒的发生。该项目是建立一种快速的PCR检测对虾白斑杆状病毒的方法，依据纯化后病毒DNA酶切片段序列设计、筛选一对特异性强、灵敏度高的引物，建立模板快速制备技术，开发了快速的对虾白斑杆状病毒PCR检测试剂盒。与其它方法比较，具有以下几个优点：1.灵敏度高、特异性好。每毫克组织10-100个病毒即可检出。2.取样量少，仅需1-10毫克组织。3.简便快速，半天即可完成10个样品的检测。为促进该项目成果向产业化、商品化发展，不断改进检测方法，简化模板制备，摸索PCR反应条件，进一步缩短反应时间，同时改进试剂盒配方，提高试剂盒稳定性，实验证明，在37°C放置七天，试剂盒仍较稳定。在上述PCR检测的基础上，在反应体系中设计一个内标模板，建立了定量PCR内标法，采集大量感染程度不同的样品，进行定量PCR检测，初步确定病毒感染的危险临界值为每毫克组织 1000个病毒粒子。根据上述结果，开发了半定量PCR检测试剂盒。目前上述试剂盒，已在全国各沿海城市推广使用。该课题完成对虾白斑杆状病毒PCR检测试剂盒的研制；建立定量PCR检测方法；发表论文一篇。