[00150352]猪乙型脑炎病毒检测套式反转录聚合酶链反应法

1.课题来源：本标准为自治区质量技术监督局下达广西兽医研究所承担的2011年第十二批广西地方标准制定（修订）项目计划（桂质监函[2011]884号）,编号为2011-12014（属自筹资金项目）。 2.技术原理及性能指标：本标准的主要依据是参考有关文献资料,结合我国国情以及广西实际,通过实验室研究试验及临床验证后,并参考其他资料经室内、室间验证提出。本标准的主要内容是通过套式RT-PCR对临床病料样品或者细胞培养物中JEV进行快速检测与诊断。 以J EV 疫苗株为模板,建立了检测猪JEV 的套式RT-PCR 方法。应用该方法对JEV 疫苗株RNA 进行扩增,获得与预期大小相符,长度为228 bp 的目的片段。而阴性对照、空白对照、PRRSV、CSFV以及PPV、PRV扩增产物均无228 bp特异性条带出现。检出JEV-RNA 的灵敏度约为0. 3 pg ,表明该方法对JEV 的检测特异性强、敏感性高（详见发表论文“日本脑炎病毒套式RT-PCR方法的建立与初步应用”,动物医学进展,2009,30 （12） :528）。在采集的465份JE疑似病料样品中,采用该方法检测有72份为JEV阳性。并从选定的2份阳性病料,通过接种BHK-21细胞、乳鼠及SPF鸡胚,分离获得两株JEV地方分离毒株,该方法检测结果与其分离培养结果与预期完全相符。该方法可满足对猪脑、流产胎儿、猪精液及蚊子样品中JEV 检测的需要（详见发表论文“广西猪乙型脑炎病毒的分离与初步鉴定”,南方农业学报,42（9）:1151-1156）。 3.应用情况及存在的问题：由于受到时间紧、资金有限以及疫病综合防控监测与效果评估所需要求条件所限,在大范围内尤其在中小型猪场及散养户推广应用本课题成果,还需在时间、资金、沟通协调及技术方面加强支持力度。