[00031782]一种杀虫晶体蛋白的非受体结合蛋白及其提取方法与应用
技术详细介绍
苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt）制剂是世界上应用最广的微生物杀虫剂，其主要活性成分为杀虫晶体蛋白（Cry蛋白）。Cry蛋白的杀虫机制是一个复杂的进程，Cry先是被昆虫中肠蛋白酶作用后激活，之后与中肠BBMV膜表面的受体蛋白如氨肽酶N（APN）、碱性磷酸酶（ALP）和钙黏蛋白类等结合，形成寡聚体，插入膜内，形成离子孔洞，最终导致害虫死亡。Cry蛋白与受体的结合，被公认为是其杀虫过程极其重要的一个关键步骤。虽然Cry蛋白已经广泛应用于防治害虫，但是目前超过60%的害虫对转基因作物产生了抗性。此外，仍然有许多重要的害虫因现有的Cry蛋白对其活性不高而无法得到防治。针对Cry应用中存在着的这两个重要问题，全球科学家们研究了多种对付手段，包括更换cry基因、分离新型cry基因、对Cry蛋白实施改造使其与受体蛋白更好地发生结合以提高其杀虫活性等。但是，研究者忽略了害虫中肠中可能存在着能结合Cry蛋白的非受体分子进而影响了Cry的杀虫活性。本发明公开了一种杀虫晶体蛋白的非受体结合蛋白及其提取方法和应用，该非受体结合蛋白包括但不局限于微管蛋白、谷胱甘肽合成酶、ATP合成酶、精氨酸激酶、凝集素、胰蛋白酶、翻译延伸因子和细胞色素C氧化酶，且该非受体结合蛋白是通过亲和层析自包含中肠肠腔液的害虫中肠的水溶性物质中提取的，上述亲和层析所用的亲和分子为杀虫晶体蛋白Cry。应用本发明的非受体结合蛋白可在不改变工厂现有产品基础上，提高Cry的杀虫活性，克服害虫对现有产品所产生的抗性问题，以及一些重要害虫对现有产品活性不高的问题。
