[00037580]重组工程介导的定点突变方法
技术详细介绍
本发明涉及一种基于重组工程介导的定点突变方法。本方法是先通过重叠-延伸聚合酶链式反应获得一个含有与克隆在质粒上的待突变靶位点上游50bp序列一致的左端50bp同源臂、突变位点、靶基因突变位点的下游片段、与质粒所含的抗性基因不同的另外一个抗性基因和载体所含的抗性基因下游的50bp右端同源臂的一个DNA修饰片段。随后将此融合片段电转化表达重组酶的、含有克隆有靶基因的质粒的大肠杆菌中，通过重组酶介导的同源重组，直接获得靶位点发生定点突变以及原质粒上的抗性基因被修饰片度做携带的抗性基因所取代的重组克隆。
