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摘要:本发明公开一种巨大口蘑原生质体的制备方法。所述制备方法,包括如下步骤:用渗透压稳定剂对巨大口蘑菌丝进行预处理,然后采用蜗牛酶与纤维素酶组成的混合酶液对巨大口蘑菌丝进行酶解,所述混合酶液中,纤维素酶的质量浓度为3.5~4.0%,蜗牛酶的质量浓度为0.5~1.0%,余量为渗透压稳定剂;最后对酶解液进行过滤,离心,所得沉淀即为巨大口蘑原生质体。本发明所用的混合酶液比单一的溶壁酶价格低一半以上,大大降低了科研中巨大口蘑原生质体的制备费用,为利用原生质体技术进行巨大口蘑育种和基因工程奠定了基础;同时,本发明的巨大口蘑原生质体的制备方法成本比传统的制备方法降低一半以上,而且得到的原生质体释放量和再生率均处于较高水平。