本发明公开了一种高均一度大分子量Levan型果聚糖的制备方法,利用现代分子酶工程技术对果糖基蔗糖转移酶进行分子改造,获得果糖基蔗糖转移酶突变体H280R,成功在大肠杆菌中进行原核表达,通过对表达的蛋白纯化,将纯化的酶与底物蔗糖反应,经乙醇沉淀得到Levan型果聚糖样品。本发明采用的果糖基蔗糖转移酶突变体H280R制备Levan型果聚糖时,底物蔗糖的浓度可以达到40%,通过凝胶色谱法确定了其分子量的大小为2×106Da,属于大分子多糖,且Levan型果聚糖均一性好,分散度为2.06,优于目前生物法制备Levan型果聚糖。