本发明公开了一种含两性离子的多重酸敏感抗肿瘤载药胶束及其制备方法和应用,属于生物材料领域。所述含两性离子的多重酸敏感抗肿瘤载药胶束包括两性离子的亲水外壳,含两个酸敏感键的疏水内核。所述方法利用醇交换法将丙烯酸羟乙酯和2,2‑二甲氧基丙烷脱甲醇,合成2,2‑二(丙烯酰氧基‑1‑乙氧基)丙烷;利用开环β‑丙内酯连接2‑(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯合成羧酸甜菜碱甲基丙烯酸酯;利用原子转移自由基聚合法,得到羧酸甜菜碱甲基丙烯酸酯单体聚合物;利用原子转移自由基聚合法和迈克尔加成一锅法,合成了三嵌段的两亲性聚合物,再采用超声滴入法及透析法制备纳米载药胶束。所述载药胶束可提高化疗药物的抗肿瘤效果。