[00059525]一种基于双标记扩增的血浆循环甲基化DNA电化学检测方法及试剂盒
技术详细介绍
本发明公开了一种基于双标记扩增的血浆循环甲基化DNA电化学检测方法，属于甲基化DNA检测技术领域。本发明使用不同标记(地高辛，生物素)的甲基化特异性引物，通过聚合酶链式反应(PCR)鉴别亚硫酸氢盐修饰的基因组样品中的甲基化DNA而不是非甲基化等位基因；利用聚合酶的扩增能力，产生大量具有地高辛和生物素双标记的双链扩增子；通过修饰在金电极表面的地高辛抗体捕获这些双链扩增子；然后通过生物素‑亲和素结合作用捕获辣根过氧化物酶缀合的抗生物素蛋白(Avidin‑HRP)，利用酶的催化过程产生电化学信号。该方法具有良好的灵敏度，能检测5pg的甲基化DNA分子，同时具有良好的特异性，能够在有大量非甲基化DNA干扰下检测出1％的甲基化DNA。
