本发明提供了一种皮革生产过程中无硫化碱、无石灰的皮革脱毛和皮纤维松散方法及其应用,该方法的特点是采用以蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和糖化酶为复合酶体系的酶脱毛和酶纤维松散、碱性条件下的非硫(硫化碱)脱毛剂脱毛和无灰(石灰)碱膨胀下酶纤维松散相结合的方法,实现制革过程中完全无硫化碱、无石灰脱毛和皮纤维松散。该方法通过使用复合酶浸水、复合酶脱毛、非硫化物脱毛剂脱毛、膨胀调节剂-氢氧化钠膨胀和碱性条件下的酶松散相结合的方法达到脱毛和皮纤维松散的效果,消除了制革生产过程中动物皮脱毛和皮纤维松散工序中硫化物和石灰带来的污染。本发明的方法适合各种类型用途皮革的各种动物皮的脱毛和皮纤维分散加工。