本发明公开了一种干酪乳杆菌抗菌肽及其多抗的制备方法。本发明抗菌肽是以干酪乳杆菌发酵的天然细菌素(抗菌肽)产物为模板人工设计并合成的一种小分子多肽,包括16个氨基酸残基,其氨基酸序列为:MDSLKTLLVANRGEIV,其多克隆抗体制备步骤如下:(1)干酪乳杆菌抗菌肽的设计与合成;(2)合成多肽与载体蛋白交联;(3)用干酪乳杆菌多肽免疫原进行动物免疫;(5)从免疫后的动物体内取血,收集、分离得到含有抗体的血清,纯化抗体,即得到抗干酪乳杆菌多肽的抗体。本发明干酪乳杆菌抗菌肽具有分子量小、人工合成简单的特点。用本发明方法制备抗体具有特异性好和高效价的特点,为干酪乳杆菌发酵产生细菌素(抗菌肽)的检测领域的应用提供了重要工具。