本发明公开了一种小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3电转染的方法,该法主要采用等渗透压的电转染缓冲液,对小鼠成纤维细胞NIH/3T3进行一次放电,通过等渗透压和高压脉冲电场压组合,使得细胞体积增大,高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA通过膜上形成的小孔导入细胞质中,从而提高电转效率。实际试验表明,应用本发明质粒pmaxGFP(绿色荧光蛋白)转染到小鼠成纤维细胞NIH/3T3,转染效率最高可以达到55%左右。本发明可以缩短试验周期,节约成本,减少繁琐的操作步骤,并且安全无害,为小鼠成纤维细胞NIH/3T3细胞系的后续研究提供了关键的技术支持。