本发明公开了一种pH响应型的磁性复合纳米球及其制备方法与应用,该磁性复合纳米球由Fe3O4纳米粒子,包覆在Fe3O4纳米粒子表面的亲水性氨基聚合物以及接枝于亲水性氨基聚合物表面的含双键的苯硼酸衍生物的聚合物构成。本发明提供的pH响应型的磁性复合纳米球,以Fe3O4纳米粒子作为核,具有高的磁饱和强度,从而提供较好的磁响应性能,可以在较短的时间内完成磁分离;由于表面接枝的苯硼酸衍生物的聚合物高分子刷的存在,可以在酸性/碱性环境下可逆的、高效的、高选择性的捕获和释放糖蛋白,对糖蛋白的回收率接近100%,且可重复使用,能潜在应用于高特异性糖蛋白捕获和分离。