本发明提供了一种基于色差对比的土霉素检测试纸、使用方法及制备方法,属于环境分析领域。该土霉素检测试纸包括结合区、显色区和吸水区,依次排布,以PVC胶板为底衬;试纸一端的结合区粘贴含有土霉素适配子的玻璃纤维素膜,试纸中间的显色区粘贴含有石墨烯/纳米铂的硝酸纤维素膜,试纸另一端的吸水区粘贴吸水纸,中间显色区的硝酸纤维素膜分别与结合区的玻璃纤维素膜和吸水区的吸水纸间有重叠;使用过程中,同时对标准水样与待测水样进行测定,通过对比试纸显色区颜色的差异,判断待测水样中土霉素含量是否超标。本发明具有制备简单,使用方便,性能稳定等优点,适用于水环境中土霉素的快速检测。