本发明涉及一种基于硼酸‑二醇特异性识别作用的层层组装薄膜的制备方法。所述方法包括:通过氨基苯硼酸与聚丙烯酸PAA的羧基之间的缩合反应将苯硼酸PBA基团接枝到聚丙烯酸PAA骨架上,得到产物聚丙烯酸‑苯硼酸PAA‑PBA;然后利用聚丙烯酸‑苯硼酸PAA‑PBA与葡聚糖Dex之间的硼酸‑二醇特异性识别作用在热解石墨PG电极表面上组装{PAA‑PBA/Dex}n LbL薄膜,然后再从溶液中吸入肌红蛋白Mb,形成{PAA‑PBA/Dex}n‑Mb薄膜。该薄膜为保持Mb的生物活性提供了良好的微环境,为蛋白质的固定提供了一种新型的LbL薄膜,为设计基于酶的直接电化学的生物传感器提供了一个新的思路。