本发明公开了一种基于胶原制备组织工程表皮的方法,采用人表皮干细胞作为种子细胞,以经过牛胎盘I型胶原构建的3D无细胞基质作为支架,利用添加MMPs抑制剂的CELLnTEC培养系统,气液界面分离法构建为一种有活性的全层组织工程表皮。与现有技术相比,本发明本发明利用通过分化培养基中添加MMPs抑制剂marimastat 5nM,有效减少了支架和人工表皮产品的收缩。利用I型牛胶原3D支架结合CELLnTEC培养系统,能够维持表皮干细胞的增殖和分化,不使用成纤维细胞,有效减少了人工表皮产品制备过程中的工作量和操作步骤。