本发明公开了一种生产泥鳅四倍体的方法,所用雄亲鱼为自然四倍体泥鳅,雌亲鱼为二倍体泥鳅,干法受精,受精后立即将受精卵放入0℃水中处理50‑60min,之后置于常温曝气水中正常孵化。本发明选用染色体数目不同的两种泥鳅即二倍体(2n=50)和四倍体(4n=100)泥鳅,通过冷休克处理抑制第二极体释放,诱导四倍体,对其所产生后代的染色体数目、DNA相对含量、血红细胞核体积、染色体数目及微卫星等进行了较系统的分析,证明四倍体泥鳅诱导真实性和可靠性,为泥鳅种质资源保护与利用以及进一步对泥鳅在水产养殖在生产起到应用价值。