本发明涉及一种卵巢大皮质片玻璃化冷冻保护液及冷冻方法。虽然玻璃化冷冻法已广泛应用于实验动物中,但目前还没有一个通用的冷冻方法和标准的冷冻液配置方案,导致玻璃化冻存的体积移植徘徊在小体积阶段,而卵巢小皮质片所含卵泡有限,影响移植卵泡的寿命。本发明提供了适用于卵巢大皮质片的玻璃化冷冻保护液,在常用玻璃化液的基础上添加了促性腺激素,本发明进一步提供了适用于卵巢大皮质片的玻璃化冷冻方法,特别是玻璃化冻存不同体积卵巢大皮质片的最适宜的渗透平衡时间,方便实验动物、良种大家畜、突然死亡的野生濒危物种卵巢的冻存;采用此方法能够提高卵泡存活,缩短移植物的血流再灌注的时间,提高冻存卵巢移植回体内的存活率。