本发明公开了一种人呼吸道博卡病毒半巢式PCR检测试剂盒及其非诊断性检测方法。该试剂盒包括:1)病毒保护液,其成份为青霉素200U/ml、链霉素200U/ml、两性霉素B200U/ml和BSA0.125%;2)病毒裂解液,其成份为10mmol Tris-HCl、1mmol EDTA、15mmol NaCl和0.5%SDS,pH为8.0,溶剂为水;3)扩增引物,扩增引物为NS1545F、NS1962R和NS1835R。本发明对人呼吸道博卡病毒不仅检出率高,而且不用提取病毒基因组DNA,同时也不需应用荧光定量PCR技术进行检测,降低了临床患者博卡病毒的检测成本,提高了检测效率。