本发明涉及一种同时测定小柴胡颗粒中环磷酸腺苷、黄芩苷和甘草酸含量的方法,其特点是,包括如下步骤:(1)制备对照品储备液;(2)制备供试品溶液;(3)高效液相色谱测定:用高效液相色谱仪进行测定;分别进样,按色谱条件测定,以峰面积和对照品体积做校正曲线,得到环磷酸腺苷、黄芩苷和甘草酸的回归方程分别为:Y=242.17X-35.103,R2=0.9969;Y=178.38X+97.653,R2=0.9998;Y=113.69X+94.29,R2=0.9987。通过本发明的方法采用超声波提取,RP-HPLC同时测定小建中颗粒中的环磷酸腺苷、黄芩苷和甘草酸取得了较好的效果。