本发明公开一种96孔酶标板氯霉素分子印迹聚合膜的制备方法,按如下步骤进行:将模板分子氯霉素、功能单体甲基丙烯酸二乙基氨基乙酯和交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯按照摩尔比1:4:0.2溶解于致孔剂四氢呋喃中,超声30min;所述四氢呋喃的用量为5ml/0.25mmol氯霉素;加入引发剂偶氮二异丁腈,超声15min,加入量为5mg/0.25mmol氯霉素;将b步骤所得溶液滴加到96孔酶标板上,之后将96孔酶标板放入密封袋中,充入氮气,密封且紫外灯照射条件下,引发聚合6小时;再将96孔酶标板置于体积比为3:1的甲醇—乙酸混合液中,超声洗脱48小时;50℃干燥96孔酶标板2小时,得到氯霉素分子印迹聚合膜。