本发明提供了一种发酵生产乳酸的微生物混合菌群及发酵方法,所述的微生物混合菌群包括梭状芽孢杆菌属菌株、埃希氏杆菌属菌株和肠球菌属菌株,其总有效活菌数占微生物混合菌群中有效活菌数的94%以上,所述的芽孢杆菌属菌株、埃希氏杆菌属菌株和肠球菌属菌株的有效活菌数比例为40‑60:20‑40:2‑20。相对于单菌发酵,该微生物菌群发酵稳定性好、生物安全性高、糖蜜耐受性高,在500g/L未处理糖蜜中也能够生长代谢,具有高生产强度和乳酸转化率。该微生物混合菌群还具有生产过程中无需灭菌、发酵底物糖蜜无需预处理、生产成本低等优势。