本[发明专利]提供了一种安卡拉病毒实时荧光定量PCR引物对,包括FAdV‑4‑F和FAdV‑4‑R。所述引物对可用于制备安卡拉病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒,从而对安卡拉病毒进行病毒含量的检测。该试剂盒包括阳性对照标准品、PCR反应液和阴性对照;所述阳性对照标准品为含有FAdV‑4序列的重组质粒pMD18‑FAdV‑4;所述PCR反应液包括提取的模板DNA,引物对,SYBR GreenⅠ荧光染料溶液,Taq酶,ddH2O,所述SYBR GreenⅠ荧光染料溶液包括SYBR Green I荧光染料、dNTP、反应缓冲液;双蒸水作为阴性对照。用本[发明专利]的引物对制备的安卡拉病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒,检测方法简便快捷,重复性好,敏感度高,特异性强,可以实现大通量样品的检测,可对安卡拉病毒进行快速的、高敏感度的实时荧光定量PCR检测。