本发明属于生物检测领域,具体涉及一种同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB含量的方法。包括以下步骤:采集苦玄参鲜株,阴凉处晾干制成苦玄参药材。苦玄参药材粉碎,称取适量药粉,用50%~70%浓度甲醇,加热回流30~40分钟,中性滤纸初滤,滤液用微孔滤膜过滤,得提取液。提取液以苦玄参苷IA和苦玄参苷IB为对照品,采用Agilent?ZORBAX?SB-C18柱、乙腈-水为流动相,在检测波长264nm、柱温35℃、流速1.0ml/min条件下,用高效液相色谱测定其含量。本发明测定方法能同时测定苦玄参药材中苦玄参苷IA和苦玄参苷IB的含量,具有快速、准确、稳定且重复性好、节约测定成本的特点。