本[发明专利]所述一种鸡生殖新月来源PGCs的分离培养方法,包括以下步骤:(1)分离方法是通过贴滤膜法从种蛋中取出无卵黄污染的干净鸡胚,然后从鸡胚中获取生殖新月组织;(2)用胰酶将生殖新月组织消化成单细胞,然后对单细胞中的PGCs进行纯化;(3)将纯化后PGCs置入含有BRL-3A细胞饲养层和PGCs完全培养液的培养体系中培养。本[发明专利]中的PGCs来源于鸡胚生殖新月区,5-8HH期鸡胚生殖新月区的PGCs含量较高,具有更好增殖活力和维持高水平的多能性,贴滤膜法分离鸡胚胚盘,操作简单,重复性好,从种蛋中分离出无卵黄污染的干净鸡胚,获得较为纯净的PGCs。分离培养的PGCs可大量增殖,用于后续实验操作。