本发明公开了一种抗氧化活性肽及其制备方法,其特征在于以蓝圆鲹鱼肉蛋白为原料,采用枯草杆菌2709产生的碱性蛋白酶水解,水解液灭酶后经离心、超滤、凝胶层析和反相高效液相色谱等分离并确定其中两种天然抗氧化肽的结构,其氨基酸序列分别为His-Asp-His-Pro-Val-Cys(组氨酸-天冬氨酸-组氨酸-脯氨酸-缬氨酸-半胱氨酸)和His-Glu-Lys-Val-Cys(组氨酸-谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸-半胱氨酸),其清除50%DPPH·自由基所需浓度(EC50)分别为0.0310±0.0011μM和0.0677±0.0012μM,清除50%超氧阴离子(O2-·)自由基所需浓度(EC50)分别为0.3814±0.0017μM和0.3744±0.0021μM,具有良好的抗氧化活性。