本发明涉及一种蛋白的提取纯化工艺,具体是从心肌中提取纯化高铁肌红蛋白的方法。具体的方法是:将新鲜动物心肌经前处理,萃取得到组织蛋白粗提物;粗提物再经硫酸铵盐析后,通过截留分子量为14000的透析处理得透析样品;将透析样品经DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换层析,收集红褐色洗脱液;收集的洗脱液再经SephacrylS-200HR凝胶过滤层析,收集洗脱峰相对应的红褐色洗脱液,即得到纯化的高铁肌红蛋白。本发明方法具有产品纯度高,工艺简单、成本低等优点,既可填补我国该生物试剂制备的空白,又具有较高的经济价值。