[00094809]一种用于生态土壤系统基质DNA的提取方法
技术详细介绍
本发明公开了一种用于定性、定量评价土壤-植物生态系统基质功能菌的微生物基因组DNA的提取方法，在细胞裂解前对样品进行预处理，称取土样5g，加入净洗液A，漩涡震荡1分钟，放入超声波常温水浴10分钟，在上清液中再加净洗液A，摇匀，在4℃，1000*rpm下离心5分钟，移去上清液，经预处理的土样加入磷酸钠缓冲液B和MT缓冲液C，置于FastPrep仪器上2分钟，速度5.5，冰上冷却后，4℃，14000*g下离心15分钟，上清液中再加入试剂D，在4℃，14000*g下离心5分钟，上清液中加入悬浮液E以沉淀蛋白质，混合物以至于SPINTM试管中，4℃，14000*g下离心，移去SPINTM滤管，放入试剂盒提供的试管中，室温干燥5分钟，后加入试剂G和重悬的DNA洗脱液，4℃，14000*g下离心5分钟，离心管即分离DNA，储存于-20℃。本发明通过土壤预处理，去除腐殖质，提高DNA产量，所提取的基质微生物DNA可直接应用于分子操作，具有简便，重复性好，准确可靠的特点。
