一种检测己烯雄酚的非标记电化学免疫传感器及其制备方法和应用。所述的免疫传感器,包括基底电极,在基底电极表面沉淀纳米金后,修饰石墨烯-己烯雄酚-壳聚糖复合物,并以牛血清蛋白封闭非特异性活性位点。其制备方法是在基底电极表面沉淀纳米金后,利用壳聚糖将石墨烯和己烯雄酚包被并固定于电极表面。所述的免疫传感器基于免疫反应的竞争模式,利用K3Fe(CN)6为探针,以差分脉冲伏安法监测免疫反应,可用于己烯雄酚检测。本发明的传感器具有高灵敏度和专一性,检测方法简单,适用范围广泛,检测限可达到0.1ng/ml,线性范围0.5~1500ng/ml,具有快速现场检测、灵敏度高、成本低等特点。