本发明公开了工业微生物发酵领域中一种酿酒酵母发酵生产谷胱甘肽的工艺,该酿酒酵母生产谷胱甘肽发酵工艺为利用改良O‑media发酵培养基,发酵16 h时以1.5 g/L/h和0.4 g/L/h恒定速度流加糖蜜和玉米浆,在细胞密度达到一定程度后,向发酵液中添加一定量KMnO4缓释颗粒和柠檬酸钠等,发酵120 h时,发酵液中细胞湿重达到121.4 g/L,GSH积累量达到5.78 g/L,本发明通过O‑media发酵培养基改良、糖蜜和玉米浆流加,提高发酵液细胞密度;通过氧化刺激物KMnO4缓释颗粒添加,维持对酵母细胞氧化胁迫同时缓解其对酵母生长的影响;通过能量辅助物质柠檬酸钠添加,改善胞内ATP水平,最终显著改善谷胱甘肽积累量,降低生产成本。