本发明涉及一种固定化酶生物技术,特别涉及一种有机基团功能化介孔分子筛酶固定化载体及其制备方法。该载体包括介孔分子筛,其特征在于在介孔分子筛表面存在能与酶共价结合的有机基团官能团。该方法包括介孔分子筛的合成和介孔分子筛表面有机功能团的移植,载体的平均孔径为5-20nm,比表面积在340-600m2/g之间,载体固定化酶表观活性为1000-2000IU/g,重复使用次数10次后,载体固定化酶表观活性保留原始活性的90%以上。制备的功能化介孔分子筛借助自身的活性基团能够在温和的条件下以共价结合方式固定生物酶分子,获得的固定化青霉素酰化酶具有高的催化活性和使用稳定性。