本[发明专利]提供了一种分离与原代培养犬胎盘来源的间充质干细胞的方法,包括:1)犬胎盘保存液的配制;2)新生犬脐带的采集;3)从产后废弃组织中分离出胎盘组织;4)清洗和剪碎组织块;5)胰蛋白酶消化;6)分离除去红细胞;7)扩增培养。本培养方法操作简单、重复性好,从中可获得较少的杂细胞和无污染的纯净间充质干细胞。培养方法中使用的胎盘保存液能避免胎盘运输过程中细菌的大量增长,为后期成功分离胎盘间充质干细胞提供基础,胰蛋白酶消化方法快速便捷,单细胞产量高且能较好保持细胞活性,最后用Ficoll分离法除去红细胞,能获得较纯的具有较强增殖能力的间充质干细胞,可用于后续该细胞的建系、干细胞特性与治疗疾病等。