本发明公开了一种表达IBV的S1和N双抗原蛋白重组质粒及其构建方法和应用,发明人根据GenBank中注册的鸡传染性支气管炎病毒S1、N和Ub基因序列设计引物,通过PCR扩增鸡传染性支气管炎病毒中国分离株GX‑YL5株的S1、N和鸡的Ub基因,并用分子生物学方法将鸡传染性支气管炎病毒中国分离株GX‑YL5株N和S1基因与鸡Ub基因插入真核表达载体pVAX1中,构建了表达N和S1基因与鸡Ub基因共表达质粒,研制了DNA疫苗pVAX1‑Ub‑linker‑N‑S1。实验证明,该疫苗预防IBV疗效显著。应用本发明可同时将IBV的S1、N和鸡Ub基因串联插入pVAX1载体,用于预防鸡传染性支气管炎。