本[发明专利]公开了一种分离与原代培养胎盘壁蜕膜间充质干细胞的方法,其包括以下步骤:1)分离及前处理:将取到的胎盘样品浸泡消毒液30s,清洗数次至液体不再呈血红色,剥离羊膜,分离壁蜕膜组织,用PBS清洗后剪碎;2)消化:I型胶原酶消化2h,加入完全培养基终止消化,得到细胞混悬液;3)原代培养:将细胞悬浮液倒入200目滤网过滤,收集滤液1200rpm离心5min,弃上清,下层细胞经无血清培养基反复吹打混匀至散开后接种到明胶包被的培养皿中,以37℃、5%CO2浓度的环境条件下培养。本[发明专利]并且通过调整消化液的选用和原代培养中的工艺参数,从而获得比胎盘间充质干细胞活性更好,纯化程度更高的胎盘壁蜕膜间充质干细胞。